FPALM

FPALM (Fluorescence PhotoActivation Localization Microscopy), neboli fluorescenční fotoaktivační lokalizační mikroskopie, je jednou z metod lokalizační super-rezoluční mikroskopie založené na stochastickém (náhodném) zobrazování individuálních zářících bodů. Stejně jako PALM, tak i FPALM slouží k přesné lokalizaci a zobrazování buněčných struktur označených fotoaktivovatelnými fluorescenčními proteiny (PAFPs) ve snímku a pro správnost a použitelnost metody musí být splněny určité předpoklady:

• zvolit optimální množství PAFPs, jejichž vzdálenost musí být vyšší než konvenční rozlišovací schopnost objektivu

• PAFPs mají dva stavy (aktivní – fluorescenční a neaktivní – temný), které lze přepínat (switch) pomocí světelných paprsků s různými vlnovými délkami. PAFPs jsou schopné se přepínat i stochasticky

• fotony nasnímané z jednoho PAFPs lze detekovat pomocí CCD, přičemž lokace je ovlivněná bodovou rozptylovou funkcí (PSF)

• střed PSF je určen matematicky – danému PAFP je pak přiřazena přesnější pozice

Touto metodou, stejně jako pomocí PALM, STORM, STED, SRRF-Stream a SIM lze dosáhnout super-rezolučních výsledků s rozlišením v jednotkách nm. Nevýhodou těchto metod je obvykle delší doba snímání celého obrazu, jelikož se musí nasnímat velké množství dílčích obrazů.