K používání a měření webu využíváme cookies. Používáním tohoto webu souhlasíte se způsobem, jakým s cookies nakládáme. Další informace

Mikroskopie živých buněk – předpoklady

Mikroskopie živých buněk (live cell imaging) je velmi oblíbenou metodou v oblasti buněčné biologie. Získání správných a kvalitních informací podléhá několika specifickým faktorům, které mohou experimenty s živými buňkami výrazně ovlivnit. Pro live cell imaging doporučujeme konfokální mikroskop na bázi rotujícího kotoučeSDCM (spinning disc confocal microscope), anebo widefield fluorescenční mikroskop se softwarem pro dekonvoluci.

Máte zájem o tuto aplikaci? Potřebujete radu?
Kontaktujte nás

Při pozorování živých buněk (live cell imaging) je třeba klást veliký důraz na redukci foto-toxických účinků světla (bleaching). Hustota výkonu osvětlení na rovině vzorku, kompatibilní se životem zkoumaných buněk, se pohybuje v rozmezí od mW/cm2 (widefield fluorescenční mikroskopy) do W/cm2 (konfokální mikroskopy SDCMspinning disc confocal microscopes). Při vysoké hustotě výkonu osvětlení dochází k intenzivnímu bleachingu fluoroforů, což vytváří volné radikály a další reakční produkty, které ničí molekuly v okolí a mění prostředí vně a uvnitř buněk.

Buněčné kultury a tkáně je nutné udržovat ve fyziologických podmínkách po celou dobu experimentu. Faktory jako teplota, vlhkost, složení média a pH jsou velmi důležité pro získání smysluplných informací o zkoumaných procesech. V závislosti na původu kultivovaných buněk je třeba nastavit výše zmíněné faktory na konkrétní hodnoty a tyto hodnoty udržovat stabilní.

Video:

Mitochondrie v gliomových buňkách. iXon Ultra, 60x, NA: 1.49. Nasnímáno bylo celkem 6 478 1Mpx snímkůVoxel 0.201*0.201*0.293 um, X/Y:1024*1024 pixelů, Z:41, T:79, 2 kanály. Data byla nasnímání během krátkého (13 min) time-lapse experimentu při demonstraci systému Andor Dragonfly. Vzorky poskytla Dr. Veronika Huntošová z UPJS/CIB, Košice, Slovensko.

Esenciální vybavení pro live cell imaging mikroskop je uvedeno v tabulce:

Konfokální mikroskop Andor Dragonfly splňuje všechny předpoklady pro zobrazování živých buněk (live cell imaging):

Rychlost snímání

  • 400 snímků za sekundu (512 × 512 pixelů)
  • Minimální expozice – 2,5 ms

Citlivost

  • 90% kvantová účinnost u kamer iXon (EMCCD)
  • 82% kvantová účinnost u kamer Zyla (sCMOS)

Kontrola prostředí

  • Inkubátory od předních světových výrobců (Okolab)

Mikroskop

  • Precizní XY a Z piezo motorizovaná stage
  • Hardware autofocus
  • Specializované objektivy

Další

  • Active blanking – propojení mezi světelným zdrojem a kamerami
  • Filtry – kompatibilní s požadovanými vlnovými délkami v excitační a emisní cestě

Webinář


Produkty pro Mikroskopie živých buněk – předpoklady

Konfokální mikroskop Dragonfly

Konfokální mikroskop Dragonfly

Konfokální mikroskop dosahující až 100 fps při plném rozlišení

Inkubátory

Inkubátory

Regulace teploty, vlhkosti a CO2–O2

iXon Ultra 888

iXon Ultra 888

Nejcitlivější EM CCD kamera na trhu s 1Mpx rozlišením

Zyla

Zyla

Extrémně rychlá a citlivá kamera se senzorem sCMOS

Imaris

Imaris

Software pro 3D vizualizaci a intuitivní analýzu objemných obrazových dat

Sona

Sona

Back-illuminated sCMOS rychlá a citlivá kamera

KONTAKTNÍ FORMULÁŘ