Im Allgemeinen sind dichroitische Spiegel eine Art von Interferenzfiltern, die Licht nach Wellenlänge trennen.
In der Mikroskopie werden sie aufgrund ihrer Fähigkeit eingesetzt, Anregungs- und Fluoreszenzlicht (Emissionslicht) voneinander zu trennen, wenn sie im Strahlengang in einem Winkel von 45° zur Lichtquelle angeordnet werden. Längere Wellenlängen (Emissionsstrahlen) durchdringen diesen Filter, kürzere Wellenlängen (Anregungsstrahlen) werden blockiert und im Winkel von 90° in das Objektiv reflektiert. Die Effizienz der Trennung von Anregungs- und Emissionslicht ist bei dichroitischen Spiegeln hoch – der Reflexionsgrad des Anregungslichts beträgt mehr als 90 % und der Durchlassgrad des Emissionslichts ebenfalls mehr als 90 %.
Dichroitische Spiegel sind beispielsweise Bestandteil von Fluoreszenzmikroskopen, wo sie je nach Emissions- und Anregungsmaximum des verwendeten Fluorophors entweder ein Maximum an Emissionslicht durchlassen oder ein Maximum an Anregungslicht reflektieren.
