SRRF Stream – Real-Time Super-Resolution Radial Fluctiation
Nová, velmi rychlá a flexibilní metoda pro super-rozlišovací mikroskopii, kterou lze provozovat, díky její použitelnosti přes velmi široký rozsah fluoroforových hustot a excitačních sil, i s běžnými fluorofory (např. GFP) za nízké intenzity osvětlení.
V závislosti na parametrech lze dosáhnout vysokého rozlišení 50 – 150 nm s hodnotou excitační síly více než 106krát nižší, než je typické u běžných lokalizačních metod mikroskopie. Díky rychlosti snímání v super-rozlišení, která odpovídá hodnotě > 10 snímků za sekundu a výstupu v reálném čase, lze SRRF Stream využít při studiu rychlých, dynamických fyziologických procesů v živých buňkách na úrovni jednotlivých molekul.
SRRF využívá konceptu Radiality polí jako prvního důležitého kroku k dosažení super-rozlišení, kdy jsou analyzovány radiální přechody v každém bodě obrazu při interpolovaném uživatelsky definovaném rozlišení, které je větší než rozlišení přirozeného pixelu přijímací kamery.
Výsledkem je složitá oblast dat obsahující velké množství informací o lokálních gradientech intenzity, které poskytují podrobné informace o přesném umístění fluoroforů v rámci jednotlivých snímků. Na diagramu je fluorescenční značka (červený křížek) středem pole intenzity gradientu, jakožto bod maximální radiální symetrie. Proces SRRF vyžaduje snímání a složení více snímků najednou (typicky 50 – 100), aby bylo možné odvodit jediný výstupní obraz s vyšším rozlišením. Metoda SRRF Stream je vázaná primárně na použití EMCCD kamer od Andoru, konkrétně na iXon Life a iXon Ultra, které lze nainstalovat na jakýkoliv mikroskop bez nutnosti pořizování drahých systémů určených pro super-rozlišovací mikroskopii.
