K používání a měření webu využíváme cookies. Používáním tohoto webu souhlasíte se způsobem, jakým s cookies nakládáme. Další informace

Konfokální mikroskopie SDCM ve srovnání s alternativami

Na rozdíl od snímání klasickou metodou fluorescenční mikroskopie v režimu widefield je u konfokální mikroskopie potlačen signál ze vzorku, který pochází z oblasti mimo ohniskovou rovinu. Díky tomu lze pozorovat preparáty o větší tloušťce při zachování kontrastu a vysokého poměru signálu vůči šumu. Na konfokálním mikroskopu vybaveném detektorem nebo kamerou a pracovní stanicí s příslušným software (Imaris) je pak uživatel schopný digitálně rekonstruovat trojrozměrný model celého preparátu (3D vizualizace). Existují dva hlavní přístupy:

Nevýhodou laserové skenovací konfokální mikroskopie je soustředění velice intenzivního laserového paprsku na každý zobrazovaný bod (pixel). Tím je preparát dlouhodobě vystaven toxickým účinkům světla. Navíc je nutné, aby světlo z laserového paprsku dopadlo na všechny snímané body postupně, z čehož vyplývá výrazné omezení rychlosti snímání, především při vysokém rozlišení (např. 2048 x 2048 pixelů). K potlačení signálu z oblasti mimo ohniskovou rovinu dochází díky použití tzv. “pinhole” o variabilní velikosti, která je umístěna před detektorem.

Widefield (vlevo), konfokální mikroskopie (vpravo). Jedna optická rovina (60x 1.2NA).
Obrázek 2.: Widefield (vlevo),konfokální mikroskopie (vpravo). Jedna optická rovina (60× 1.2 NA). Obrázky pořízené v režimu widefield obsahují signál z oblasti mimo ohniskovou rovinu. Konfokální mikroskop na bázi rotujícího disku poskytuje ostrý obraz z jedné ohniskové roviny s více detaily a také s vyšším kontrastem a dynamickým rozsahem. Dragonfly, Andor (Andor, 2016).

Uspořádání optické cesty - SDCMKonfokální mikroskopie na bázi rotujícího Petráňova/Nipkowova disku (spinning disc) dosahuje velmi rychlého snímání obrazu o vysokém rozlišení. Excitační optická dráha vede skrz tzv. rotující disk obsahující vysoké množství “pinholes”, které zajišťují konfokalitu získaného obrazu (Obrázek 3.). Již při pootočení disku o několik stupňů dosáhneme pokrytí celého zorného pole (rychlosti se pohybují kolem 6000 otáček za minutu - Dragonfly). Další výhodou konfokální mikroskopie na bázi rotujícího disku je použití citlivých a velice rychlých kamer s vysokým dynamickým rozsahem pro detekci obrazu (Zyla/iXon).

Klíčové výhody spinning discu

  • Vysoká rychlost snímání (stovky až tisíce snímků za sekundu)
  • Vysoká citlivost (kvantová účinnost kamer až 95 %)
  • Nízká foto-toxicita
  • Redukovaný foto-bleaching
Zdroj zprávy: „Spinning Disk Confocal – A Technical Overview...“ Accessed November 25, 2016 www.andor.com/learning-academy/spinning-disk-confocal-a-technical-overview
Máte zájem o tuto aplikaci? Potřebujete radu?
Kontaktujte nás

Produkty pro Konfokální mikroskopie SDCM ve srovnání s alternativami

Konfokální mikroskop Dragonfly

Konfokální mikroskop Dragonfly

Konfokální mikroskop dosahující až 100 fps při plném rozlišení

Imaris

Imaris

Software pro 3D vizualizaci a intuitivní analýzu objemných obrazových dat

Zyla

Zyla

Extrémně rychlá a citlivá kamera se senzorem sCMOS

iXon Ultra 888

iXon Ultra 888

Nejcitlivější EM CCD kamera na trhu s 1Mpx rozlišením

Sona

Sona

Back-illuminated sCMOS rychlá a citlivá kamera

KONTAKTNÍ FORMULÁŘ